论文标题：An ELISA to Detect Antibodies to Bovine Alphaherpesviruses 1 and 5 and Bubaline Alphaherpesvirus 1 in Cattle Sera

论文链接：https://www.mdpi.com/2306-7381/10/2/110

期刊名：Veterinary Sciences

期刊主页：https://www.mdpi.com/journal/vetsci

引言

牛α疱疹病毒1型（Bovine alphaherpesvirus 1，BoAHV-1）、牛α疱疹病毒5型（BoAHV-5）以及水牛α疱疹病毒1型（Bubaline alphaherpesvirus 1，BuAHV-1）同属疱疹病毒科α疱疹病毒亚科，是反刍动物中重要的病原体。BoAHV-1 和 BoAHV-5 可引起呼吸道、生殖系统及神经系统疾病，而 BuAHV-1 随着水牛养殖规模的扩大，其流行病学意义日益受到关注。上述病毒在基因组和抗原结构上具有高度相似性，可诱导明显但并非完全一致的交叉反应抗体，这为血清学诊断带来了挑战。

在牛和水牛混合或毗邻饲养的生产模式下，不同α疱疹病毒之间的跨物种传播风险增加。对感染动物的准确识别对于制定防控措施、保障国际活畜贸易具有重要意义。目前，血清中和试验（Serum Neutralization，SN）被视为检测相关抗体的参考方法，但操作复杂、耗时较长，且结果易受所选病毒株影响。现有ELISA多以单一病毒株作为抗原，其对不同类型和亚型α疱疹病毒抗体的检测能力尚缺乏系统评估。

在此背景下，本研究开发并评估了一种多抗原ELISA（mAgELISA），旨在实现对所有已知 BoAHV-1、BoAHV-5 及 BuAHV-1 类型和亚型抗体的全面检测。

图 1. 中和抗体阳性牛血清在血清中和试验（SN）和制备型单一抗原 ELISA（sAgELISA）中对七种反刍动物 α疱疹病毒作为挑战病毒或抗原的反应性谱。仅显示在任一检测中结果不一致的样本（n = 46）。黑色方块：在两种检测中对某一特定毒株均呈阳性反应；白色方块：在两种检测中对某一特定毒株均呈阴性反应；竖纹：仅在 SN 中对某一特定毒株呈阳性反应；斜纹：仅在 sAgELISA 中对某一特定毒株呈阳性反应。

研究内容与结果

本研究共收集600份牛血清样本，来源于巴西南里奥格兰德州的10个牧场，相关动物的免疫及既往感染史未知。所有样本首先分别针对7种不同的α疱疹病毒类型或亚型进行血清中和试验，以此作为参考结果。

在ELISA构建方面，研究人员分别以7种病毒株制备单抗原ELISA（sAgELISA），系统比较不同抗原在检测灵敏度方面的表现。结果显示，不同病毒株作为抗原时，对同一血清样本的检出能力存在差异，部分样本在不同检测体系中呈现不一致结果。

基于上述比较结果，研究筛选出5种在单抗原ELISA中表现出较高灵敏度的病毒抗原，并将其按优化比例混合，构建多抗原ELISA（mAgELISA）。该方法通过在同一反应体系中引入多种抗原，提高了对交叉反应抗体的整体识别能力。

在性能评估中，mAgELISA 与 SN 结果进行系统比较。数据显示，在600份血清样本中，mAgELISA 对α疱疹病毒抗体的检测灵敏度为 96.5%，特异性为 96.1%，与血清中和试验高度一致（Kappa 值 0.93）。同时，与多种单抗原ELISA相比，mAgELISA 在检测阳性样本数量方面表现出更稳定的一致性，仅有极少数样本结果存在差异。

研究还指出，若仅依赖单一病毒株作为检测抗原，可能导致部分感染动物未被识别，从而在防控和流通环节中带来潜在风险。多抗原策略在一定程度上降低了这一不确定性。

结论

本研究表明，所建立的多抗原ELISA 能够有效检测牛血清中针对 BoAHV-1、BoAHV-5 及 BuAHV-1 各类型和亚型的抗体，其灵敏度和特异性与血清中和试验相当。通过引入多种病毒抗原，该方法在识别交叉反应抗体方面表现出更高的覆盖能力。

在当前牛与水牛养殖并存、α疱疹病毒流行类型复杂的背景下，该检测方法可作为一种适用于群体筛查的血清学工具，为疾病监测、防控策略制定以及活体动物贸易中的健康评估提供支持。研究同时指出，该方法并不具备区分感染与疫苗免疫（DIVA）的能力，其应用场景需结合各国防控政策具体评估。

总体而言，本研究为反刍动物α疱疹病毒的血清学检测提供了一种具有实践意义的技术方案，也为后续相关诊断方法的优化奠定了基础。

Veterinary Sciences 期刊介绍

主编：Patrick Butaye, Ghent University, Belgium; City University of Hong Kong, China

发表与兽医科学领域相关的原创研究文章、评论、通讯和简短说明，主题包括动物疾病、紊乱和损伤的预防、诊断和治疗。