作者:刘雯 来源:科学网 www.sciencenet.cn 发布时间:2016/9/19 13:51:19
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国际抗体验证工作组发布验证抗体特异性五大策略

 

国际抗体验证工作组(IWGAV)是全球范围内由研究方向各异的蛋白质生物学家组成的独立工作组。IWGAV 9月19日在瑞典斯德哥尔摩披露,为满足在抗体特异性、功能性和重复性的迫切需求,该工作组已于9月在《Nature Methods》在线发表了初步的战略建议。“针对建立广泛可接受的抗体验证标准和为生物医药研究提供始终如一的高质量抗体,这篇文章的发表预示迈出了重要的第一步。”瑞典斯德哥尔摩皇家工学院的微生物学教授兼IWGAV主席Dr. Mathias Uhlén表示。

尽管抗体是科学研究中最常用的一种工具,但是没有全面准确的科学架构来验证抗体在不同研究方法上的特异性。据估计,在美国和全世界使用特征不明确的抗体每年分别浪费3.5亿和8亿美元,而这样的抗体会导致实验失败或结果不可靠。IWGAV是首家为抗体生产商和使用者制定抗体验证策略的组织。作为世界领先的科技服务供应商,赛默飞世尔科技在2015年为IWGAV提供经济支持,从而引领行业标准的开发,并帮助科研人员克服抗体特异性和重复性带来的共同挑战。

IWGAV确定了五个支柱策略,以指导通过特定应用进行抗体验证的方式:一是基因策略:利用CRISPR/Cas 或RNAi等技术,将对照细胞或组织中的目标基因敲除或敲低,并检测这些对照细胞或组织中的相关信号。二是正交策略:使用非抗体依赖方法对大量样品进行定量,并检测基于抗体和非抗体定量间的相关性。三是独立抗体策略:使用2种或多种可识别目标蛋白表面不同抗原决定簇的独立抗体,并通过对比或定量分析确定特异性。四是标签蛋白的表达:为内源性目标基因添加亲和标签或荧光蛋白标签。利用抗体检测方法可对来自标签蛋白的信号进行校正。五是免疫捕获及质谱分析(MS):免疫沈淀(IP)技术可通过使用与目标蛋白特异性结合的抗体分离出目标蛋白,其与MS分析结合(IP-MS)可识别与纯化抗体直接发生相互作用的目标蛋白以及可能与目标蛋白形成复合物的蛋白。

尽管上述每一项策略都能为抗体特异性提供证据,但IWGAV建议采取多项策略来阐明抗体在不同研究应用中的特异性。发表在《Nature Methods》上的文章在抗体重复性上,还对生产商和用户提出了建议。发表在《Nature Methods》上的提议旨在为抗体验证和重复性标准提供科学基础,并鼓励建立广泛认可的抗体综合性使用指南。(刘雯)

 
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