□本报记者 姜炯
借着“863”计划资助的东风，由中生北控生物科技股份有限公司牵头的重点项目“生物医学关键试剂”已经进入结题阶段。在“十一五”期间，由该公司牵头的这个重点项目涉及到体外诊断领域相关的多个企事业单位，而中生北控更是为圆满完成该重点项目不遗余力，公司所属多家子公司都积极参与。中生北控下辖子公司之一的中生金域诊断技术有限公司就是其中之一。
继承传统的创新产品
中生金域承担了“生物医学关键试剂”重点项目的子课题“生化诊断试剂”中“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”和“骨源性碱性磷酸酶/钙联合测定试剂盒”的研发工作。
其实，这两个产品的“前辈”都是中生金域的在市场上口碑颇佳的拳头产品。“‘需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒’目前已经完成了全部审批、注册程序，商品名被定为‘爱必维’试剂盒，它的上代产品是‘妇炎知’试剂盒。较之‘妇炎知’氧化氢H2O2（阴道乳酸杆菌的标志物）、唾液酸苷酶NAase（加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物）和白细胞酯酶LE（炎性细胞的标志物）三项检验指标，‘爱必维’又整合了β-葡萄糖醛酸苷酶Gus和凝固酶GADP（AV致病菌的标志物）两项指标。这样，该产品就能够测定由厌氧菌和兼性厌氧菌引起的BV，即临床上所谓细菌性阴道病，以及由需氧菌引起的AV，即临床上所谓需氧菌阴道炎。”中生金域诊断技术有限公司副总经理肖艳说。另据介绍，“骨钙知”的上代产品，则是中生金域另一主打产品——“骨源性碱性磷酸酶试剂盒”，而新产品又整合了对小儿血清钙的检测。
AV/BV同步快速检测，意义重大
以往认为，BV的致病菌主要为加德纳菌，近来采用系统分离方法发现，加德纳菌仅占BV致病菌的30%，而消化链球菌、普雷茨菌等厌氧菌占70%。AV是近年新发现的
一种细菌性阴道感染，2008年shamim等研究AV致病菌和抗生素的敏感性发现，该病的主要致病菌为金黄色葡萄球菌（40%）、E.coli（13%），粪肠球菌（20%）和B族链球菌（6%）。这些细菌对piperacillin和tazobactam的敏感性均在90%以上，为AV的诊断和治疗提供了详实的微生物学方面的实验数据。
BV的诊断金标准仍为1983年制定的Amsell方法，我国将唾液酸苷酶也纳入了BV的诊断标准。由于Amsell需做四项检测，特别是湿片镜检寻找线索细胞十分费时，在门诊量较大的实验室无法开展这些检测，因此，我国绝大部分实验室，特别是农村和城市社区等基层实验室，主要是用单项唾液酸苷酶诊断BV，由于许多细菌和真菌均可产生此酶，单用唾液酸苷酶诊断BV时，易造成误诊。
“AV的诊断主要采用Gilbert提出的，经Tempera修改的综合诊断方法，其中，AV评分为必备指标，但AV评分十分复杂，需综合阴道分泌物中乳酸杆菌分级、白细胞数量以及中毒白细胞所占比例、背景菌落数等指标，不适于在临床常规，特别是医院门诊、农村和城市社区等基层使用。”肖艳说。
为提高阴道炎的诊断效率，最近国外推出了许多阴道分泌物生化标志物快速诊断技术，其中细菌代谢产物和细菌预成酶酶谱分析最为常用。如用脯氨酸氨肽酶、唾液酸苷酶诊断BV，用H2O2评价阴道乳酸杆菌的生物活性；用丙氨酰氨肽酶筛查阴道厌氧菌感染，用脯氨酸氨肽酶和N-乙酰半乳糖胺酶联合测定筛查阴道白色假丝酵母菌感染以及用胱氨酰氨基肽酶筛查滴虫性阴道炎等。
“爱必维”采用干化学的检测方法，实现了AV/BV的同步检测，并且可以在反应十分钟之后快速判读结果。这些技术简便、快速，能满足阴道炎门诊快速诊断和农村、城市社区等基层医疗卫生机构阴道炎诊断的需求。
没有参考，从头研究
因为尚未有AV的快速诊断技术和产品作为参考，中生金域以总经理王加义领衔的研发团队分析了按照Tempera标准诊断的AV患者的阴道菌群。“我们发现AV患者产H2O2的乳酸杆菌减少甚至消失，金黄色葡萄球菌、E.coli、粪肠球菌上升，46例患者的阴道分泌物中，金黄色葡萄球菌的检出率为42%、E.coli的检出率为28%，粪肠球菌的检出率为23%，仅两例检出GBS，与文献报告大致相同。”王加义说。
为寻找这些需氧菌的预成酶，王加义和他的同事选择从临床样品中分离出的金黄色葡萄球菌、E.coli、粪肠球菌、GBS等四株需氧菌；普雷沃、消化链球菌两株厌氧菌和加德纳菌，测定了这些菌的磷酸酶（ALP）、β-半乳糖苷酶（Gal）、岩藻糖苷酶（Fuc）、β-葡萄糖苷酶（Glu）、β-葡萄糖醛酸苷酶（Gus）、β-甘露糖苷酶（Man）、唾液酸苷酶（SNa）、β-N-乙酰半乳糖胺酶（GalNAc）、β-N-乙酰葡萄糖胺酶（GluNAc）、亮氨酸氨基肽酶（LAP）、丙胺酰氨基肽酶（AAP）、精氨酰氨基肽酶（ArAP）、脯氨酰氨基肽酶（PAP）、脯氨酰-谷氨酰二肽酶（PGDP）、丙氨酰-精氨酰二肽酶（AADP）、甘氨酰-精氨酰二肽酶（GADP凝固酶）16种酶。
不懈努力，终于确定检测指标
根据上述研究，中生金域的研究团队确定将Gus、GADP作为阴道需氧菌感染诊断指标。此外，AV和BV都是阴道菌群结构改变的结果，这种改变的一个重要特点是乳酸杆菌，特别是产H2O2的乳酸杆菌减少或消失，因此，我们将H2O2列为AV和BV的诊断指标之一；AV区别于BV的一个重要特点是阴道分泌物中可见大量白细胞并伴有大量中毒性改变，而白细胞酯酶是反映中毒白细胞的一个有效指标，因此，我们将白细胞酯酶LE列为AV的生化指标。
鉴于唾液酸苷酶单项指标诊断BV存在阳性率偏高的问题，临床上采用阴道分泌物H2O2和唾液酸苷酶联合测定技术，有效地提高了BV诊断的特异性。
“最终，我们确定细菌性阴道病（BV）/需氧菌阴道炎（AV）联合测定试剂盒的检测指标为H2O2、LE、SNa、GUS、GADP等五项。”王加义说，“根据研究结果，我们申请了两个实用新型和发明专利，现已获国家专利局的受理。”
《科学时报》 (2010-8-20 B3 检验医学)
