作者:Michael O Hengartner 来源:《自然—方法学》 发布时间:2010-10-20 15:00:44
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大尺度鉴定miRNA靶点新法问世


(图片来源:《自然—方法学》)

《自然—方法学》网络版近日介绍了瑞士苏黎世大学分子生命科学研究所迈克尔·恩加特纳(Michael O Hengartner)研究组发明的一种大尺度鉴定miRNA靶点新方法。
 
在过去几年中,随着实验和计算方法的发展和完善,miRNA靶点的鉴定和预测研究取得很大进展。然而,全面正确地鉴定miRNA的生物学相关靶点依然是个难点。恩加特纳研究组发明了一种叫做“选择性反应监测”(selected reaction monitoring,SRM)的方法,该方法利用有针对性的质谱技术实现了对miRNA-靶点互作的大尺度蛋白组学分析,进而对预测的靶点进行验证。
 
恩加特纳等人利用线虫let-7突变体及其野生型为实验材料。为了测定由于let-7突变体数量减少导致的蛋白含量的下降,恩加特纳等人对感兴趣的let-7突变体和野生型的蛋白提取物进行化学标记,之后对其进行SRM质谱分析,获得了可靠的目标蛋白的定量数据。该实验使用了一套let-7可能的靶点基因及一套对照基因。结果发现,161个蛋白中的29个蛋白的表达含量在突变体中发生变化,这可能是由于let-7基因和不同的靶点互作结果——该结果得到了独立下游实验包括遗传互作、多聚核糖体分析和荧光素酶检测的验证。
 
SRM技术可以作为一个验证工具来进一步探讨对于靶点的理解;此外,SRM也可能用来精细描述目标蛋白质组亚群,促进miRNA生物功能模型的研究。(科学网 任春晓/编译)
 
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