作者:岑东等 来源:《中国生物工程杂志》 发布时间:2009-12-15 10:18:57
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肝细胞生长因子拮抗剂活性研究
 
NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂,在一篇文章中,研究人员将NK4基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体,转化大肠杆菌,进行了这种分子的活性研究。
 
NK4是肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)α链的含 447个氨基酸的片段,包括N末端的发夹结构和4个Kringle结构,编码序列长度1434bp,相对分子量50kDa。NK4保留了与受体cMet结合的结构域,可与HGF竞争结合cMet受体,但不能诱导cMet的酪氨酸磷酸化,从而阻断 HGF/Met系统的信号转导,抑制HGF的生物学效应,是目前已知的 HGF的最佳拮抗剂。体外实验证实NK4可抑制HGF诱导的肿瘤细胞的增殖、迁徙和侵袭。此外,NK4还能抑制血管新生。因此NK4在肿瘤治疗方面前景广阔。
 
研究人员为规模化生产NK4蛋白,将NK4基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4,并转化大肠杆菌Rosseta(DE3)。转化菌经IPTG诱导后以包涵体形式大量表达重组蛋白,占菌体总蛋白的42%。包涵体用盐酸胍溶解后经NiNTA树脂亲和层析纯化,蛋白纯度约为95%,经Western blot证实为NK4蛋白。纯化的重组蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙,并诱导其凋亡,证实制备的NK4蛋白具有生物活性。
 
外源性蛋白表达通常采用真核表达和原核表达两种方式,前者获得的蛋白活性较高,但效率低,不便于规模化生产;后者成本低且可大量表达,虽存在蛋白易发生折叠错误形成无活性的包涵体等问题,但可通过复性使目的蛋白恢复生物学功能。这项研究在现工作基础上构建NK4重组原核表达载体,并进行了相关条件的摸索,为后续NK4的深入研究提供了依据。
 
参与这项研究的包括温州医学院,重庆医科大学的裴仁治教授,涂植光教授,岑东博士等,文章发表在《中国生物工程杂志》上。(来源:生物通)
 
 
 
 
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