自从1970年Baltimore和Temin等人发现逆转录酶，就拉开了研究RNA和转录本的序幕。cDNA克隆——细胞内RNA的拷贝是分子生物学，转录本分析的经典技术之一，它提供了研究新转录本功能的必要资源。过去的30多年，cDNA克隆技术提高到能够对较大的cDNA进行克隆，为我们更好地理解和运用遗传信息打下了基础。随着非编码RNA的发现，一些新的短的RNA的克隆新方法也发展起来。

 

首先是逆转录酶和cDNA第一链的合成。逆转录酶是DNA或者RNA依赖的DNA聚合酶，可以利用DNA或者RNA合成DNA。cDNA的克隆主要是通过寡聚胸腺嘧啶从3 ’A尾巴开始合成cDNA，但这样得到的cDNA克隆中有10%~15%没有3’端的序列；6到9个核苷酸随机引物也可用于逆转录的反应中，这对于长转录本5’端的扩增很有利，但是这样的方法不能得到全长cDNA；其次是合成cDNA第二链。单链cDNA3’端的发卡结构，便于DNA聚合酶I发挥5’→3’聚合酶活性，合成cDNA的第二链；最后将双链cDNA克隆到质粒和噬菌体载体中进行扩增，最后进行测序，研究转录本的信息以及功能。

 

虽然cDNA克隆的方法随着技术的进步而不断得到提高，但是对于全长cDNA克隆以及小RNA和长的非编码RNA的克隆还有一定难度，现在还有很多低丰度的转录本没有研究，而这些转录本可能有着很重要的生物学功能，而cDNA克隆无疑为未来的研究提供了一个很好的技术支持。

 

原文链接：http://www.sciencedirect.com/science/journal/08887543　　（周媛媛/编译）

 

《科学新闻》 (2008年 9月 第1期 封面集锦)